Ttulo do Trabalho: Verificao da Atividade Lipoltica de

Ttulo do Trabalho: Verificao da Atividade Lipoltica de

Ttulo do Trabalho: Verificao da Atividade Lipoltica de
Pseudomonas Isoladas das Lagoas de Tratamento de Dejetos
de Sunos e de Efluentes de Abatedouros de Frangos.
rea de conhecimento: Engenharias.
Autores: Elisa Helena Siegel Moecke (orientadora), Aline Ferreira Ali de vila (bolsista - Art. 170).
Curso de Engenharia Ambiental-Campus Grande Florianpolis-Unidade Ponte do Imaru

Resultados

Introduo
A biotecnologia uma das ferramentas tecnolgicas da atualidade, tem contribudo nas mais diversas
reas, como agrcola, alimentcia, monitoramento de produtos de excreo e qualidade ambiental, alm da
produo de novos produtos para a indstria qumica e farmacutica. Tecnicamente, o termo biotecnologia
o uso de sistemas biolgicos, organismos vivos ou seus derivados para a produo ou modificao de
produtos e processos para um uso especfico.
Muitos fungos e bactrias sintetizam e secretam enzimas, industrialmente teis no processamento de uma
variedade de materiais. Uma das enzimas produzidas por microrganismos a lpase. Atua sobre a ligao
ster de vrios compostos, sendo os acilgliceris seu melhor substrato. O uso de enzimas em processos
tecnolgicos, muitas vez, no vivel economicamente. Uma das formas de deixar o processo mais
barato, us-las na forma imobilizada.
Diversas espcies de Pseudomonas, entre as quais P. aeruginosa e P. putida isoladas do meio ambiente
(em geral guas de esgoto), comprovaram em laboratrio a bioproduo de enzimas lipolticas (lipases).

Objetivos
Verificar a capacidade lipoltica das Pseudomonas isoladas de sistemas de tratamento de dejetos de
sunos e de efluentes abatedouros de frangos, em sistemas de transesterificao visando a produo de
biodiesel.

Metodologia
Os microrganismos utilizados neste projeto foram isolados por alunos de projetos de Iniciao Cientfica
realizado em anos anteriores e que esto disponveis no laboratrio de Engenharia Ambiental LEA da
UNISUL. Estes microrganismos foram isolados a partir de amostras provenientes de sistemas de
tratamento de dejetos de sunos lagoa anaerbica (Figura 1) e de sistemas de tratamento do tipo lagoa
de decantao de efluentes de abatedouro de frangos. Os microrganismos isolados foram reativados
utilizando o meio de Agar Cetrimide (AC) (figura 2) usando a tcnica de estriamento em placa e incubadas
a 37C durante 48h. Aps o crescimento as colnias foram identificadas morfologicamente, pela tcnica de
colorao de Gram e tambm atravs de provas bioqumicas.

A Tabela 1 a seguir apresenta as caractersticas morfolgicas dos microorganismos isolados
das lagoas de dejetos de sunos e de efluente de abatedouro de frango.
Tabela 1. Caractersticas morfolgicas dos isolados.
Isolados

Meio

Forma

Bordos

Elevao

Tamanho

Pigmentao

Aspecto

Superfcie

IPS-1

Cetrimide

circular

lisos

plana

2-3mm

branca

opaca

lisa

IPS-2

Cetrimide

circular

inteiros

convexa

3-4mm

creme

opaca

lisa

IPS-3

Cetrimide

irregular

lobados

plana

6mm

amarela

translcida

lisa

IPS-4

Cetrimide

circular

lisos

convexa

3-4mm

branca

brilhosa

lisa

IPS-5
Cetrimide
circular
plana
2-3mm
amarela
lisa
Na tabela
2 so
apresentados
os lisos
resultados
dos testes
de colorao
de opaca
Gram e das
provas
bioqumicas: Catalase, Coagulase, Oxidase e Prova do Vermelho de Metila (VM) para os
isolados selecionados.
Tabela 2. Resultados dos testes de colorao de Gram e provas bioqumicas.

Isolados

Gram

Forma

Catalase

Coagulase

Oxidase

VM

IPS-1

-

bacilos

+

-

-

+

IPS-2

-

bacilos

+

-

+

+

IPS-3

-

bacilos

+

-

-

+

IPS-4
- para o testebacilos
+
- o teste realizado
Legenda: (+)
resultado positivo
realizado, (-) resultado
negativo para
.

+

IPS-5
+
Na tabela
3 so apresentados
os bacilos
resultados da atividade
lipoltica
dos isolados.

+

Tabela 3. Atividade lipoltica das bactrias isoladas utilizando o mtodo da titulao dos cidos
Graxos liberados.

Isolados

Tempo de Reao / Volume de Inculo
Atividade lipoltca
24h/1mL
U/mL

48h/1mL
U/mL

48h/5mL
U/mL

IPS-1

0,131

0,018

0,023

IPS-2

0,026

ND

0,028

IPS-3

0,92

0,030

0,001

IPS-4

0,34

ND

ND

IPS-5

0,89

ND

ND

As enzimas extracelulares produzidas pelas Pseudomonas, quando usadas como
catalisadores nas reaes de transesterificao, no foram eficientes para produo de
biodiesel. Os valores de Rf obtidos durante a anlise cromatogrfica de camada delgada
(CCD) ficaram abaixo de 0,45. Para que haja a formao de biodiesel o Rf deve estar na faixa
de 0,6 e 0,7.
Figura 1-Suinocultura localizada em Antonio Carlos-SC
FONTE: AVILA,2010.

Figura 2-Meio Agar Cetrimide
FONTE: AVILA,2010

Fermentao Submersa
Foram retiradas trs aladas da colnia caracterizada e transferidas para um Erlenmeyer de 250mL
contendo 100mL do meio de crescimento (Figura 3) , a 30C 1C e sob agitao de 100rpm por 48h. Aps
este tempo foram retirados volumes de 1mL e 5mL da cultura (inculo) para frascos Erlenmeyers de
125mL contendo 50mL do Caldo Adaptador, mantidos sob agitao de 100rpm por 24h e 48 h a 30C 1C
e aps atuao da enzima extracelular (Figura 4) foi medido a atividade lipoltica das enzimas
extracelulares por titulao dos cidos graxos liberados com KOH 0,05N usando fenolftalena como
indicador (AOCS, 2002).

Concluses
As 5 cepas caracterizadas quanto morfologia, tcnica de colorao de Gram e pelos testes
bioqumicos de catalase, coagulase, oxidase e vermelho de metila tiveram resultados de
acordo com a literatura no que se refere s caractersticas das bactrias pertencentes famlia
Pseudomonadaceae, e apenas a cepa IPS2 do gnero Pseudomonas. A atividade lipoltica
extracelular dos isolados variou de 0,001 a 0,92 U/mL. Os isolados que tiveram os maiores
valores de atividade lipoltica foram as cepas IPS-3 e IPS-5. As cepas IPS-1 e IPS-2
apresentaram valores de atividade lipoltica menores que os encontrados por outros
pesquisadores.
As reaes de transesterificao catalisadas pelas enzimas extraceluares produzidas pelo
inculo bacteriano no apresentaram valores de Rf que indicasse a formao de steres
etlicos (biodiesel).

Bibliografia
Figura 3-Meio para crescimento s/ inculo
FONTE: LOFFI,2010.

Figura 4-Meio de Crescimento aps a atuao da enzima
FONTE: LOFFI,2010

Foram realizados ensaios para avaliar a atividade cataltica de transesterificao das lpases extracelulares
produzidas durante a fermentao submersa visando a produo de biodiesel.

AOCS. American Oil Chemists' Society. Official Methods and Recommended Practices of the American
Oil Chemists' Society, 5 edition, Champaign, 2002.
KAMINI, N. R.; FUJII, T.; KUROSU, T.; IEFUJI, H. Production, purification and characterization of an
extracellular lipase from the yeast, Cryptococcus sp. S-2. Process Biochemistry, v. 36, n. 4, p.317-324,
2000.

Apoio Financeiro: Unisul

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